111-2 生化學 考古題詳解

dideoxyribonucleotides) 並非桑格定序法的關鍵分子。 - D：錯在 2', 5'-雙脫氧核苷酸 (2', 5'-dideoxyribonucleotides) 並非桑格定序法的關鍵分子。 [核心知識] - 桑格定序法 (Sanger sequencing method)，又稱雙脫氧終止法 (dideoxy chain-termination method)，是一種用於確定DNA序列的技術。 - 其關鍵在於使用2', 3'-雙脫氧核苷酸 (2', 3'-dideoxyribonucleotides, ddNTPs)。 - ddNTPs與正常的去氧核苷酸 (deoxynucleotides, dNTPs) 相似，但它們在2'和3'碳原子上都缺少羥基 (-OH)。 - 當DNA聚合酶 (DNA polymerase) 在合成DNA鏈時，如果錯誤地將ddNTPs摻入到新合成的DNA鏈中，由於ddNTPs缺少3'-OH基團，就無法形成磷酸二酯鍵 (phosphodiester bond)，導致DNA鏈的延伸終止。 - 通過在四個不同的反應中分別加入少量的ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP，可以產生一系列不同長度的終止片段，從而推斷出DNA序列。