109-2 生化學 考古題詳解

的原料，沒有它們DNA聚合酶無法工作。 - D：突變的引子 (mutated primers) 是將預期突變引入目標DNA序列的關鍵，它們帶有與模板DNA不完全配對的鹼基，從而引入突變。 [核心知識] - 基因定點突變 (site-directed mutagenesis) 是一種分子生物學技術，用於在特定的 DNA 序列上引入精確的、預先設計好的突變。 - 最常用的方法是利用聚合酶鏈式反應 (PCR) 為基礎的技術，例如 QuikChange 突變法。 - 這個過程通常需要： 1. 含有目標基因的質體 DNA (plasmid DNA) 作為模板。 2. 帶有目標突變序列的合成引子 (mutated primers)。這些引子會與模板 DNA 結合，並引入突變。 3. DNA 聚合酶 (DNA polymerase)，用於延伸引子並合成新的 DNA 鏈。通常使用高保真度的聚合酶，且不具鏈置換活性。 4. 去氧核糖核苷三磷酸 (deoxyribonucleoside triphosphate, dNTPs)，作為 DNA 合成的原料。 5. DNA 連接酶 (DNA ligase) (某些方法需要)。 6. 限制酶 (restriction enzyme) (某些方法需要)。 - 反轉錄酶 (reverse transcriptase) 的功能是將 RNA 模板反轉錄成 DNA (cDNA)，主要用於從 mRNA 製備 cDNA 庫，或在 RT-PCR 中使用，與直接在 DNA 上進行定點突變無關。